T4 DNA Ligase
包装内容 |
100次 Cat:FP015 |
500次 Cat:FP010 |
T4 DNA Ligase(350 U/μl) |
35,000 Units |
35,000 UnitsX5 |
10×T4 DNA Ligase Buffer |
1 ml |
1ml X5 |
贮存条件:
-20℃保存
产品简介
该酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需ATP作辅酶。本酶不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接,也可以催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接,修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交链中的单链切口
起源
Escherichia coli carrying the plasmid that enable highly expression of T4 DNA Ligase gene。
酶贮存溶液:
活性定义
在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。
本酶的1 U相当于ATP-PPi交换反应中0.008 Weiss Unit。
纯 度
1) 2,000 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应24小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2) 2,000 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反应24小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
3) 2,000 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃下反应24小时,RNA
用 途
1)DNA片段和载体DNA的连接。
2)DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
使用注意
连接反应因末端碱基顺序的不同而反应速度各异,一般有下列倾向:
突出末端:Hind III>Pst I>EcoR I>BamH I>Sal I
平滑末端:Hae III>Alu I>Hinc II>Sma I
EcoR V>Sca I>Pvu II>Nru I
其中连接Hind III末端的速度约为连接Sal I末端速度的10~40倍;
而连接Hae III末端的速度约为连接Sma I末端速度的5~10倍。