长臂生物素标记试剂盒

Long-armed Biotin Label Kit

贮存：-20℃保存，稳定期1年

操作方法：

 1) 准备待标抗体、HRP等等:

将待标抗体配成1mg／m1溶液。

 2)生物素的活化：

从-20℃取出REAGENT Ⅱ溶媒，37℃水浴5分钟至完全溶解，取100ul，加入到REAGENT Ⅰ生物素中，轻轻吹打至完全溶解。混匀室温放置60分钟。

3)标记：

将活化的生物素全部转入1ml待标物中，加入REAGENT Ⅳ100ul, PH约在8.0-9.0，室温震荡1～3h。（1小时能完成95%的反应，2小时99%，）

4) 透析：4℃条件下使上述混合液体以PBS透析过夜，中间换液若干次（如有沉淀，离心除去后再透析）。

5) 保存：加等体积甘油，-20℃分装存放。

应用范围：

用于HRP、蛋白、核酸及核酸探针、抗体、抗原的标记，也适用含有氨基（NH4-）的小分子标记。

特点：

1.操作简便，标记率高，活性好。

2. 易于保存和运输，减少生物素的失活。

注意事项：

1）透析袋选择：

一定注意透析袋孔径的大小，防止蛋白过多渗出。一般透析袋孔径约为待标记蛋白分子量的1/10。如HRP       分子量是44KD，选择3k；抗体150KD，选择15K。  

2）透析要充分，防止游离生物素，竞争反应。

3）本方法是针对待标记物的氨基进行标记。因此待标记物的缓冲液，如果是存在于硫酸铵、甘氨酸或Tris等等有氨基的缓冲液中，需以PBS缓冲液充分透析，防止干扰标记。

4）标记时，如果PH偏酸、低于在7.5，再加入REAGENT Ⅳ100ul或适量。