EZ-RNA-B1
血液总RNA小量快提试剂盒
试剂盒内容 |
50次 Cat:RN310 |
250次 Cat: RN318 |
Miniprep column |
50 |
50×5 |
2 ml microfuge tube |
50 |
50×5 |
溶液EL Solution EL |
140 ml |
140 ml×5 |
溶液RLT Buffer RLT |
15 ml |
15 ml×5 |
溶液RN2 Buffer RN2 |
5 ml |
5 ml×5 |
溶液RW1 Buffer RW1 |
40 ml |
40 ml×5 |
溶液RPE Buffer RPE |
15 ml |
15 ml×5 |
RNase-free Water |
10 ml |
10 ml×3 |
说明书 Protocol |
1 |
1 |
贮存条件:
室温,有效期2年。
产品简介:
※ GalaxyBio 公司与国际知名品牌公司通力合作,由对方提供全方面技术、关键纯化材料,将核酸纯化等系列产品,在国内推广,实现了进口产品本土化生产。每种产品通过严格的技术把关,已达到进口产品的品质,而价格上却是国产试剂盒的价位
※ 采用独特的细胞裂解沉淀技术,快速、方便,高得率、高纯度。可从200μl-400μl的血液中快速提取高质量的RNA。
※ 提取的RNA分子完整、纯度高,适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
注意事项:
1. 所有试剂用DEPC处理过的溶剂配制。请选用RNase-free枪头和离心管,以避免提取过程中RNA被RNase降解。
操作步骤:
1.试验前准备及注意事项
试剂盒在第一次使用前请按试剂瓶标签说明在溶液RW1 和溶液RPE中加入无水乙醇,并做好标记;溶液使用后,避免长期暴露于空气中,用后请及时盖紧盖子,密闭保存。
2. 200-400 μl 全血加入3-4倍 Solution EL在离心管中混匀。
* 如果血样的体积在200-400 μl之间,适当调整加入Solution EL的体积。
3. 冰浴10-15 min。冰浴期间,温和混匀2次。3,000×g 离心5 min。用吸头尽可能丢弃上相。
* 4℃条件下离心。
4. 再加入0.5 ml-1ml Solution EL,温和混匀,冰浴5 min。
* 如果血样的体积在200-400 μl之间,适当调整加入Solution ELL的体积。
* 此步骤可重复,尽量裂解除去红细胞。
5. 3,000×g 离心5 min,尽量弃去上清,。
* 4℃条件下离心。
6. 加入250 μl Buffer RLT,用吸头抽吸,混合均匀。
7. 加入80μl Buffer RN2,振荡混匀10S, 12,000×g 离心10 min。
* 4℃条件下离心。
8. 取上清至1.5 ml离心管中。加入等体积无水乙醇,混合均匀。
步骤9-13可选择离心法或负压法
A. 离心法
9A. 将制备管置于2 ml (试剂盒内提供) 离心管中,转移步骤8中的混合液到制备管中,6,000×g离心1min。
* 4℃条件下离心。
10A. 弃滤液,将制备管弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,制备管中加入700 μl Buffer RW1,12,000×g离心1 min。
* 确认在Buffer中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
11A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,在制备管中加入700 μl Buffer RPE,12,000×g离心1 min;以同样的方法再用700 μl Buffer RPE洗涤一次。
* 确认在Buffer W2 concentrate中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
12A. 弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,12,000×g离心1 min。
13A. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中,在制备管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA
B. 负压法
9B. 将制备管插到负压装置的插口上,将步骤8中的混合液移入制备管中,开启并调节负压至-20-30英寸汞柱,吸尽管中溶液。
10B. 保持负压,加入700 μl Buffer RW1,吸尽管中溶液。
* 确认在Buffer Buffer RW1中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
11B. 保持负压,沿管壁四周加入700 μl Buffer RPE,吸尽管中溶液;以同样方法再用700 μl Buffer RPE洗涤一次。
* 确认在Buffer Buffer RPE中已按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇。
12B. 将制备管置于一个2 ml离心管(试剂盒内提供)中,12,000×g离心1 min。
13B. 将制备管放入干净RNase-free的1.5 ml离心管中,在制备管膜中央加60-100 μl Buffer TE (DNase﹠RNase-free) 。室温静置1 min,12,000×g离心1 min,洗脱得RNA。
RNA定量及纯度检测