Biuret法蛋白定量试剂盒(双缩脲法) ————————快速、准确定量蛋白
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■适用范围: 适用于组织裂解液、血清、血浆等总蛋白的测定。 ■双缩脲法的优点: (1)线形范围较宽,线性范围为1.7mg/ml~140mg/ml。适合蛋白含量较多的样品。 (2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。 (3)干扰物质少,并且大多可以避免。 (4)双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比关系,与蛋白质的种类、分子量及氨基酸的组成无明显关系,各种蛋白质的显色程度基本相同。 (5)本法重复性好,RCV为4%,CCV为3.9%; |
■测定原理 蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰,吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系,经与同样处理的蛋白质标准液比较,即可求得蛋白质含量。 ■注意: (1)本方法灵敏度较低,灵敏性1.7mg/ml,较其它方法较低。 (2)蛋白含量较少的标本,请选用本公司的Bradford或BCA法。 (3)干扰物质非常少,并且大多可以避免。 |
三种蛋白定量试剂盒比较
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Bradford |
BCA |
Biuret |
线性 |
20~1200ug /ml |
20-2000μg /ml |
1.7~140mg/ml |
精密性 |
一般 |
较好 |
最好 |
灵敏性 |
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5ug(加强法) |
850ug |
干扰物质 |
较多 |
较少 |
极少 |